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Entendiendo un Western Blot (o al menos, intentándolo)

Pues después de pasar el tramo de los exámenes finales, y el inicio del verano, y con motivo del gran Carnaval de Química que está organizando @Luisccqq, y del que quiero formar parte, volvemos a la carga. Desde que acabé las clases estoy colaborando por puro placer en el laboratorio de Biomedicina molecular y celular…

| etiquetas: western blot , ciencia , técnicas , biología molecular
9 2 3 K 66 cultura
13 comentarios
9 2 3 K 66 cultura
Comentarios destacados:    
  1. #1 --11417--
    Muy detallado, gracias
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  2. #2 --391712--
    #1 No hay de qué! Lo he leído y me ha gustado, porque es una técnica muy habitual de un laboratorio de biología molecular, que tiene múltiples usos y que poca gente fuera de este ambiente conoce. Así que, aquí va ;)
    1 K 19
  3. #3 --11417--
    #2 gracias de nuevo.

    Ando enredando para construirme un termociclador basado en Arduino y una cubeta para electroforesis, y jugar un poco y de paso tratar de enseñar a mi peque como funciona ésto del método científico, así que me viene de perlas. Y el blog me lo guardo en favoritos :hug:
    4 K 42
  4. #4 --391712--
    #3 joer, eres un crack! o_o
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  5. #5 --11417--
    #4 no te creas :-D
    1 K 16
  6. Duke00 #6 Duke00 *
    #2 #1 Interesante, pero tiene una parte que habría que aclarar. Si quieres hacer un Western Blot, el paso 4 de tinción del gel con Azul de Coomasie, habría que saltarlo. Ya que si lo tiñes con ese colorante ya no hay vuelta atrás y no puedes transferir la membrana correctamente (que sería el paso 5). En cambio si que se pueden usar otros colorantes más fáciles de eliminar después.
    2 K 29
  7. #7 --391712--
    #6 Sí, es cierto. Una vez que fijas ya no hay transferencia. Yo, por ejemplo, siempre tiño el gel después de transferir a la membrana. Tras la transferencia siempre quedan proteínas (bueno, depende de que estés ensayando, claro) y con un poco de suerte puedes ver algo antes de revelar con anticuerpos :-D Esto es solo para impacientes!
    2 K 29
  8. Duke00 #8 Duke00
    #7 Interesante, tendré que probarlo. Siempre tiro el gel directamente después de transferir.
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  9. #9 --391712--
    #8 Prueba, que muchas veces te llevas una sorpresita jejeje
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  10. TocTocToc #10 TocTocToc
    Esperemos que el ELISA dé negativo.
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  11. ScyKness #11 ScyKness
    ¡Muchas gracias por subirlo aquí! :-D
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  12. ScyKness #12 ScyKness
    #8 #9 Encantado, soy el autor. Es cierto que hice esta entrada cuando sabía que me iba a tocar hacer Westerns pero aún no había hecho. Ahora que llevo unas decenas seguro que puedo mejorar la entrada, pero nada que no sepáis ya :-)

    Lo de hacer tinción después de la transferencia nunca lo había pensado, aunque sea un rojo de Ponceau rápido que permita ver más o menos algo es una buena idea, miraré de ponerlo en práctica.

    ¡Gracias por el tip y por comentar! :-D
    2 K 33
  13. #13 --391712--
    #12 Enhorabuena por la entrada! Yo cogí por costumbre teñir con azul Comassie el gel después de la trasferencia y la membrana con Rojo Ponceau (o plata) después de revelar!!! no dejaba nada sin reutilizar, jeje ;)
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